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桃胶是超声萃树木受损位置的黏性液体,在干燥的微波空气中长时间的暴露,形成后的协同玻璃透明材料,通常是桃胶淡黄色或棕色。桃胶主要成分是多糖的工多糖和蛋白质。桃胶多糖是艺研中药的重要活性成分,具有多种生物活性和保健功能,超声萃可以降低糖尿病患者的微波血糖水平,调节血脂异常。协同此外,桃胶桃胶多糖在农业、多糖的工工业、艺研食品、超声萃医药等领域都有广泛的微波运用。
随着桃胶多糖应用的协同增加,桃胶多糖的提取方法也引起了研究者们的关注。水提醇沉法是植物多糖的传统提取方法,但由于桃胶胶体难溶于水,黏度很大,使多糖难以扩散。因此,采用传统方法提取桃胶多糖的提取率低。超声辅助萃取技术具有简便快速、高效节能、重复性好、不影响提取物的活性等诸多优点。丁成丽等将其应用于桃胶多糖的提取,提取效率为81.44%。此外,微波具有穿透力强、选择性高、加热效率高等特点,微波辅助萃取技术也被应用于植物多糖的萃取。唐黎标将微波辅助萃取技术应用于桃胶中多糖的提取,提取效率为74.7%。如上所述,利用超声或者微波的方法提取桃胶中的多糖已见报道,但尚未见到利用超声微波协同萃取技术提取桃胶中多糖的报道。因此,本文将微波和超声辅助提取技术相结合,探讨了浙江奉化地区的桃胶多糖的提取工艺,取得了较好的结果。
一、材料与方法
1、材料与仪器
XH一300UL微波超声波紫外光组合催化合成仪:北京祥鹄科技发展有限公司;W—2Q1B恒温水浴锅:郑州科泰实验设备有限公司;ModelZD一2pH计:上海精密科学仪器有限公司;TU一1950紫外可见分光光度计:北京普析通用仪器有限责任公;DT5—2A离心机:北京时代北利离心机有限公司;桃胶购于浙江奉化;其余试剂均为国产分析纯。
2、桃胶多糖的提取
(1)桃胶原胶的预处理
将桃胶原胶置于冷水浸泡24h润涨,用清水反复冲洗。取洗净的原胶,放入真空干燥箱,80℃干燥,然后用多用植物粉碎机粉碎,粉碎后使用80目筛网多次的过滤获得桃胶粉末。
(2)桃胶多糖的提取
以表2中1号实验为例,称取处理后桃胶粉末1g,加入50倍蒸馏水,在60℃、4h搅拌提取多糖粗糖后,在微波功率400W和超声功率70W的同时作用下,提取10min,重复两次。离心得到上清液,加入10mL 6mol/LHCl,然后把上清液倒入烧杯,沸水浴水解0.5h。冷却后,用氢氧化钠固体中和至中性。过滤后,加水进行稀释,得到多糖稀释水解液。
3、桃胶多糖含量测定及方法
用木糖作为多糖测定的标准品,再通过3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法测定溶液中多糖的含量。
(1)标准储备液的配制
称取100mg的木糖,置于100mL容量瓶中,加水溶解至刻度,即得木糖储备液。
(2)标准曲线的绘制
取六个比色管,分别加入0.2、0.4、0.6、0.8、1.00mL标准储备液,用蒸馏水将稀释到1mL。再加入2mLDNS试剂,100℃水浴反应5min。冷却后,加水至15mL。用紫外分光度计在波长540nm处测吸光度,以水代替木糖作为空白。分别以木糖浓度和吸光度为横纵坐标绘制标准曲线,得到的线性回归方程为:C=18.86A+25.98,R2=0.999。式中:A为吸光度,C为木糖含量(μg/mL)。
(3)样品含量测定
运用上述实验方法,将提取液重复测定三次,取三次测得吸光度的平均值,然后代入线性方程计算出多糖的含量。
二、结果与讨论
1、超声微波协同萃取工艺条件的单因素考察结果
(1)乙醇含量对多糖提取率的影响
设定桃胶中多糖的提取条件为料液比1∶100g/mL、水浴温度60℃,超声功率80W、微波功率400W、提取时间为15min的条件下,采用不同乙醇含量(体积比:0%~90%)提取多糖,结果如图1所示。由图1可知,当乙醇含量小于50%时,随着乙醇含量的增加,多糖提取率不断增加,当乙醇含量达到50%时,多糖提取率也达到了最高值。当乙醇含量高于50%时,随着乙醇含量的持续上升,多糖提取率却不断降低。因此,选择50%乙醇水溶液为后续试验的提取溶剂。
(2)水浴温度对多糖提取率的影响
设定桃胶中多糖的提取条件为乙醇含量50%,料液比1∶100g/mL、超声功率80W、微波功率400W、提取时间为15min的条件下,采用不同水浴温度(30℃~80℃)提取多糖,结果如图2所示。由图2可知,随着水浴温度的升高,多糖提取率逐渐提高,当水浴温度达到60℃时,多糖提取率达到最大值。之后,随着温度的持续升高,多糖提取率呈现下降趋势。可能原因是随着水浴温度的不断上升,使提取溶剂的运动速率及频率不断增大,更容易渗透到桃胶组织细胞中,加速多糖类物质的溶出,从而增加多糖提取率。但温度过高,可能会导致部分桃胶的结构被破坏,从而使提取率下降。因此,选择水浴温度60℃进行后续试验。
(3)超声功率对多糖提取率的影响
为了选择合适的超声功率,在乙醇含量50%,水浴温度60℃,料液比1∶100g/mL、微波功率400W、提取时间为15min的条件下,分别考查了不同超声功率(50~100W)对多糖提取率的影响,结果如图3所示。由图3可知,随着超声功率的增加,桃胶中的多糖提取率先增加后减少,在超声功率80W时,多糖提取率达到最大值。原因可能是增大超声功率有利于液体空穴泡的膨胀和形成,使桃胶组织细胞破壁能力逐渐增强,多糖的提取率不断增大。但是,当超声功率大于80W时,多糖在强剪切作用下发生断裂,导致多糖损失,从而使多糖提取率下降。因此,选择超声功率为80W。
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相关链接:桃胶多糖,二硝基水杨酸,木糖,乙醇
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